《表4 突变体的催化特性》

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《定点突变改善PvEH1对邻甲基苯基缩水甘油醚的催化特性》

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以全细胞为生物催化剂，按1.2.3方法测定各突变体对1a的催化特性。如表4所示，与E.coli/pveh1相比，E.coli/pveh1P137T的催化活性和E值均明显下降，E.coli/pveh1L237M和E.coli/pveh1I265ME值分别提高了12.5%和7.1%，催化活性却有不同程度的下降。E.coli/pveh1M129L和E.coli/pveh1M175I的催化活性和E值无明显变化。E.coli/pveh1L105I和E.coli/pveh1V106I的催化活性和E值均提高20%以上，表明L105I和V106I对催化特性提高有积极作用，所以将这两个突变位点进行组合突变，以期望得到更好的效果。且有文献报道，空间位置相近且对催化特性有积极意义的氨基酸位点同时突变可能会产生协同作用，进一步增强EHs的催化特性[16]。按1.5方法构建突变菌株E.coli/pveh1L105I/V106I，其催化特性测定结果显示，E.coli/pveh1L105I/V106I全细胞催化活性提高到493.8U/g湿细胞，是E.coli/pveh1的3.1倍；E值提高到8.3，是E.coli/pveh1的1.5倍。Reetz等[17]对An EH采用易错PCR的方法，从20 000个转化子中筛选出一株最好的突变株IS002B1，其对苯基缩水甘油醚的E值从4.6提高至10.8。Zou等[18]对来源于放射形土壤杆菌（Agrobacterium radiobacter AD1）的Ar EH活性中心周围的氨基酸进行定点突变，得到的单点突变体T247K、I108L对环氧氯丙烷的E值和催化活性均有提高，双位点组合后，突变体T247K/I108L的E值和催化活性分别提高了44%和345%。以上研究表明，在获得有效果的单点突变体的基础上进行组合突变，能够较为显著地提高酶对于特定底物的催化性质，由此可见，该方法是一种行之有效的提高酶的催化特性的方法。