《表4 Addgene保藏的Cas效应蛋白编码基因列表》

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《细菌基因组编辑技术进展》

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随着CRISPR-Cas系统的广泛研究与应用，研究人员也发现一些CEP具有局限性，如化脓链球菌Cas9（spCas9）对某些细菌具有毒性[107，172]。因此，为了避免由于CEP的毒性导致后续应用或实验的失败，须先单独对备选CEP进行毒性测试。在图2的通用质粒图谱上，CEP的选择除了常用的spCas9外，还有很多其他选择，表4总结了在Addgene上可购买的相关CEP。测试方法为将CEP先单独放在表达载体上形成pCEP，将质粒pCEP与对照质粒（建议是确定无毒性且大小一致的质粒，如含对应失活的CEP的质粒）导入宿主菌中，然后对菌落形成单位（colony-forming units，CFU）进行计数，若二者CFU相当，则认为该CEP在该宿主中无毒性，可继续往下做切割测试（图4）；若pCEP的CFU低于对照质粒（至少两个数量级），则认为该CEP在该宿主中有毒性，可弃之，并选择表4中其他CEP进行测试。