《表1 引物序列：风湿宁胶囊对RA兔关节滑膜组织MMP-3、MMP-9表达的影响》

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《风湿宁胶囊对RA兔关节滑膜组织MMP-3、MMP-9表达的影响》

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（1） 提取RNA:具体方法:采全自动快速研磨仪将滑膜组织在液氮中研磨成细粉，然后制作成组织匀浆，13 000 r/min离心3 min，分离物上清，使用EASY spin Plus组织RNA快速提取试剂盒，按照其说明书对兔滑膜组织提取总RNA，然后将提取出来的RNA标本立刻放入液氮保存，待逆转录。（2）测定总RNA的纯度:采用超微量分光光度仪测定RNA浓度及A260/A280的比值，比值介于1.8～2.0，方符合纯度要求。（3）逆转录合成cDNA:各样品取1.5μg总RNA，按照qRT-PCR反转录试剂说明书操作合成cDNA。操作方法为:将总RNA与1μl Oligo（dT）18引物溶液、4μl 5×RT Reaction Mix、1μl TRUE script H-R Tase/RI混合后，加入RNase free water定容到总体积20μl，轻轻混匀，瞬时离心，42℃孵育40 min，85℃孵育5 min失活TRUE script H-RTase。然后将合成好的cDNA先放入-4℃冰箱，待PCR扩增。（4）PCR扩增:建立如下RT-PCR反应体系:12.5μl 2×SYBR qPCR Mix、1μl DNA Template、0.5μl Forward Primer（10μM）、0.5μl Reverse Primer（10μM），引物序列见表1，加入RNase free water定容到总体积25μl，进行PCR循环，条件为:94℃3 min、94℃10 s、60℃34 s共40个循环，每个循环的延伸阶段收集荧光信号，最后进行融解曲线分析，RT-PCR各样本的峰值基本一致，无杂峰信号出现，说明产物特异度较好符合要求。