《表2 不同小滴玻璃化方法超低温保存XH33细胞的存活率》

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《小滴玻璃化法超低温保存海岛棉XH33胚性细胞的研究》

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PVS2:植物玻璃化溶液2；glycerol:甘油

将新疆海岛棉XH33胚性细胞依次置于含有0.3、0.5、0.7 mol/L蔗糖的MS4培养基（每个浓度条件下培养24 h），于4℃黑暗条件下进行预培养。随后分别使用不同的冷冻装载液（表2）对XH33胚性细胞进行装载，4℃黑暗条件下放置20 min；使用植物玻璃化溶液（plant vitrification solutions 2，PVS2）（20%甘油，15%乙二醇，10%二甲基亚砜，MS4盐溶液） 作为冷冻保护剂，对装载处理过的材料在4℃进行脱水处理20 min；然后将细胞快速投入液氮中，放置12 h；将细胞从液氮中快速取出，于40℃水浴2 min；选择不同的洗涤方法（表2）分别对细胞进行洗涤，然后在含有0.4 mol/L蔗糖的MS4培养基上进行暗培养3 d；最后转入正常培养条件下培养6 d。统计颜色正常、具有正常分生能力的细胞团。利用电子天平称取细胞团的重量。通过WPS软件（11.1.0.8214）计算细胞存活率（冷冻后存活细胞的重量/冷冻前处理细胞的重量），低温冷冻保存实验重复3次。