《表7 实时定量PCR引物》

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《利用CRISPR/Cas9技术建立小鼠Bdh2、Dnmt3a和Dusp9敲除新型胚胎干细胞系》


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共分为三个主要步骤,提取细胞的RNA,反转录为cDNA,再以cDNA为模板进行qPCR检测,根据其荧光强度计算待测基因的转录水平.首先,收集约1×106左右的细胞样本,细胞样品收集于1.5ml的离心管中,如不立即提取RNA,可将其保存于-80℃冰箱.再用Promege的反转录试剂盒将提取的RNA反转录为cDNA,最后,用KAPA SYBR FAST Universal qPCR试剂盒进行实时定量PCR反应.实时定量PCR引物如表7所示.