《表1 实时定量PCR引物》

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《冬凌草甲素对金黄色葡萄球菌生物膜的抑制机制》

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取培养至对数期（16 h）的金黄色葡萄球菌菌液0.5 m L接种至49.5 m L新鲜TSB培养基中，加入冬凌草甲素，使其终浓度分别为0、1/8MIC、1/4MIC和1/2MIC，37°C、160 r/min培养16 h，取10 mL菌悬液，根据细菌总RNA快速抽提试剂盒说明书提取细菌RNA，用NanoDrop 2000超微量分光光度计进行RNA的定量，然后采用两步反转合成cDNA，根据SYBR Premix Ex TaqTM II试剂盒说明书进行RT-PCR，引物如表1所示，以16S rRNA基因为内参。RT-PCR反应体系（20μL）:2×SYBR Premix Ex TaqTM II 10μL，上、下游引物（10μmol/L）各0.8μL，cDNA模板2μL，无RNA酶的ddH2O6.4μL。RT-PCR反应条件：95°C 30 s；95°C 5 s，60°C 34 s，共39个循环。每个样品重复3次，利用2-ΔΔCT对数据进行分析。