《表1 引物信息：利用体腔显微注射法实现非编码RNA在家蚕头部稳定过表达》

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《利用体腔显微注射法实现非编码RNA在家蚕头部稳定过表达》

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下划线部分为酶切位点，波浪线部分为保护碱基。The underlined section is the cleavage site of restriction enzyme，while the wavy lined section is the protected bases.

Trizol法提取家蚕5龄第3天幼虫总RNA，Random引物反转录为cDNA，利用ExTaq酶扩增家蚕ncRNA Bm-15（引物序列见表1），连接pMD19 T-Vector（simple）载体，测序验证。载体构建方法同陈敏等（2012）和刘晓等（2018），具体构建流程如图1所示，以piggyBac[A3-EGFP]载体为模板，扩增actinA3启动子（引物序列见表1），Bam HⅠ/NcoⅠ双酶切后连接在pFBDM载体上，构建出pFBDM[A3]载体。NcoⅠ/KpnⅠ双酶切Bm-15 PCR产物，连接在p FBDM[A3]上，获得pFBDM[A3-Bm-15]载体。Bam HⅠ/BglⅡ双酶切pFBDM[A3-Bm-15]载体，BglⅡ酶切piggyBac[A3-EGFP]，连接获得piggyBac[A3-EGFP-A3-Bm-15]过表达载体，测序验证。piggyBac[A3-EGFP-A3-Bm-152]过表达载体由实验室前期构建（刘晓等，2018）。