《表1 DENV2EDⅢ基因扩增引物序列》

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《重组登革病毒包膜蛋白第Ⅲ结构域抑制登革病毒感染的研究》

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注：划线部分为限制性内切酶酶切位点

根据DENV2E蛋白基因序列信息，设计EDⅢ目的基因上游引物和下游引物时分别引入NcoⅠ（CCATGG）和XhoⅠ（CTCGAG）限制性内切酶酶切位点及保护碱基，引物序列见表1。用Q5?热启动超保真酶扩增DENV2的EDⅢ基因片段，利用NcoⅠ和XhoⅠ限制性内切酶对目的片段进行双酶切，克隆至pET-28b（+）原核表达载体并转化至感受态细胞BL21 (DE3），对构建成功的重组菌进行测序鉴定。