《表2 本研究使用的引物》

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《重组枯草芽孢杆菌分泌表达缺陷假单胞菌磷酸三酯酶及其发酵优化》

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按照枯草芽孢杆菌密码子偏爱性进行优化合成urb，pcn，ob3，oph，mpd，ophc2，以合成的基因为模板分别用表2引物扩增基因序列，引物的两端引入Eco RⅠ/KpnⅠ，T/A克隆进pMD19-T Simple Vector分别命名为pMD19-T-urb，pMD19-T-pcn，pMD19-T-ob3，pMD19-T-oph，pMD19-T-mpd，pMD19-T-ophc2测序正确后，采用Eco RⅠ/KpnⅠ对其进行酶切，切胶回收目的片段，将经Eco RⅠ/KpnⅠ线性化的载体pHY-ZL与经Eco RⅠ/KpnⅠ消化的pMD19-T-urb，pMD19-T-pcn，pMD19-T-ob3，pMD19-T-oph，pMD19-T-mpd pMD19-T-ophc2的片段，按照质量比1:10的比例加入10μL体系中，于16℃培养箱连接过夜，转入B.subtilis WB600，涂布四环素抗性平板，挑取转化子，提取质粒，经Eco RⅠ/KpnⅠ酶切验证，得到构建成功的重组载体.