《表1 引物的核苷酸序列》

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《促红细胞生成素通过AMPK-KLF2信号通路调节脑缺血后血管新生的分子机制》

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完成造模和药物干预7 d时，取200 mg大鼠大脑缺血皮质提取总RNA，将组织放入1.5 m L EP管中，加入1 m L Trizol剪碎组织，震荡30 s，加0.2 m L氯仿，剧烈摇动30 s，室温3 min；12 000 r/min，4℃离心，15 min；计算浓度与纯度，-70℃保存。采用RT-PCR检测Krueppel样因子2（krueppel-like factor 2，KLF2）、内皮一氧化氮合酶（e NOS）、血栓调节蛋白（thrombomodulin，TM）及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）mRNA水平；PCR反应体系为10×扩增缓冲液（PCR Buffer×10μL）、脱氧核苷三磷酸底物（d NTPmix×200 umol/L）、耐热DNA聚合酶（Taq酶×2.5μL）、寡聚核苷酸引物（Primer1×40 pmoL，Primer2×40 pmoL）、靶序列模板DNA（1μg）。反应条件为95℃30 s，95℃5 s、60℃1 min（40个循环）95℃30 s，61℃15 s。取PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测结果，以β-actin作为参照，计算KLF2、e NOS、TM及VEGF mRNA水平。