《表1 β-actin、miR-455、miR-let-7f-1引物序列》

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《肺炎患儿血清miR-455和let-7f-1水平及其与疾病发生的关系》

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患儿及健康体检儿童同时清晨空腹及肱静脉抽血；取静脉血10 ml置于无菌非抗凝管中，3 000 rpm离心10 min，收集上清液，用于测定miR-455、miR-let-7f-1基因的表达，于GenBank数据获取miR-455、miR-let-7f-1的序列位点，设计待测基因位点的PCR扩增引物（南京金斯瑞生物科技有限公司），PCR扩增程序为:95℃5 min；93℃10 s，61℃30 s，重复40个循环，61℃时采集荧光；PCR反应体系为:20μl模板和50μl反应液构成PCR反应体系，见表1；PCR反应成分:2×UltraSYBR One Step RT-qPCR Buffer 5μl，Forward primer，10uM 0.4μl，Reverse primer，10uM 0.4μl，SuperE-nzyme Mix 0.2μl，RNA Template 0.6μl，Rnase-Free Water 3.4μl。CFX-96实时荧光定量PCR仪（美国伯乐）检测其表达量。