《表2 研究中使用的PCR引物》

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《梨ERF超家族全基因组鉴定及表达分析》

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参考Zhang等（2015）的方法，筛选了4个差异表达的ERF转录因子进行RT-qPCR验证。以tublin作为内参基因，采用SYBR-green染料法进行RT-qPCR。在lightcycle480实时荧光定量PCR上，采用20μL体系，包含模板cDNA 1μL，上下游引物1μL（表2），2×SYBR-Green premix 10μL，4孔重复。PCR程序为:95℃15 s，两步法扩增40个循环（60℃15 s，68℃20 s并采集荧光信号），扩增结束后，60℃保持30 s，0.5℃梯度升温至95℃，每0.5℃保持30 s，采集荧光信号绘制溶解曲线。以未摘叶处理的表达量为1做归一化，结果以2-ΔΔct计算相对表达量倍数。