《表2 引物浓度优化组合》
参考已报道的RT-LAMP实验条件[7-8],首先通过调整甜菜碱(Betaine)浓度、MgSO4浓度、扩增温度和扩增时间对反应体系和条件进行优化,具体梯度如下:Betaine终浓度分别为0.2、0.4、0.8、1.6mol/L;MgSO4终浓度分别为1、3、5、7mmol/L;反应温度分别为58、60、62、64、66℃;反应时间分别为30、45、60min。在确立初步反应体系和条件的基础上,对引物浓度进行进一步优化,内外引物浓度比例分别按6倍、8倍、10倍的组合进行,具体组合见表2。反应结束后,在PCR管中加入1μl 10倍稀释的SYBR GreenⅠ,混匀后在紫外线下观察,若有黄绿色荧光,可判断为阳性。
图表编号 | XD0053586800 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2019.06.10 |
作者 | 扈琴吉、杨宏禹、路晓、于可响、孙晓军 |
绘制单位 | 山东省农业科学院家禽研究所、山东省蓬莱市大柳行畜牧兽医工作站、山东省农业科学院家禽研究所、山东省农业科学院家禽研究所、山东省农业科学院家禽研究所 |
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