《表1 引物序列：乐胃饮加味方对胃癌前病变中NF-κB和STAT3共调控因子表达的影响》

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《乐胃饮加味方对胃癌前病变中NF-κB和STAT3共调控因子表达的影响》

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（1） 总RNA提取:各组细胞加入1m L Trizol充分裂解，加入预冷的氯仿，充分震荡萃取，再加入异丙醇沉淀后，加入90%乙醇溶液洗涤。挥干乙醇溶液后加入50μL DEPC处理水，溶解沉淀。测定RNA浓度。（2）RNA逆转录c DNA:取总RNA，Oligo（d T），双蒸水充分混匀，70℃水浴10min后冰上急冷2min。再加入Rnase抑制剂，d NTP，逆转录酶，5×Buffer，充分混匀后42℃，60min，70℃，15min，冰上2min后得到c DNA。（3）荧光定量PCR反应体系:2×SYBR buffer 10μL，c DNA 1μL，上游及下游引物各1μL，双蒸水7μL。每组3个复孔，以β-actin作为内参。反应条件:95℃预变性5min；95℃，30s，退火55℃，30s，延伸72℃，30s，共30个循环；72℃，10min。同时设置PCR仪的热盖温度为105℃。（4）目的基因m RNA的相对表达量用2-△△Ct表示，计算公式为:△△Ct=（Ct目的基因-Ct内参基因）实验组-（Ct目的基因-Ct内参基因）对照组，PCR产物扩增的特异性通过熔解曲线来分析。引物序列见表1。