《Table 1 TRI1-GFP and H1-RFP vector construction prim ers》

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《FAC1基因对禾谷镰刀菌的菌丝膨大处细胞核分裂的影响》


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pFL2质粒被用于TRI1-GFP载体构建,pXY201质粒被用于H1-RFP载体构建。从赤霉基因组数据库中下载TRI1和H1基因的完整序列,利用DNAman和Primer premier 5.0设计带有GFP和RFP同源序列的引物,以PH-1基因组为模板,分别用引物TRI1-GFP-F/TRI1-GFP-R和H1--RFP-F/H1--RFP-R克隆完整的TRI1和H1基因序列,将克隆的TRI1和H1基因经切胶纯化后,分别与用Xho I内切酶酶切后的p FL2质粒(含有编码geneticin (G418)基因序列) 和PXY201质粒(含有编码博来霉素 (Zeocin)基因序列) 共转入酵母菌株XK1-25中使目的基因与质粒融合,分别通过G418以及Zeocin抗生素筛选出带有抗性基因的转化子,经菌落PCR检测得到条带正确的阳性转化子,提取阳性转化子酵母质粒后转入大肠杆菌Escherichia coli感受态细胞中,经菌落PCR鉴定后,将筛选到的阳性克隆菌株送至北京奥科公司测序(表1)。