《表1 一代验证设计的2对引物序列》

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《酪氨酸激酶受体1型基因突变致先天性无痛无汗症1例报告并文献复习》

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在征得患儿父母同意并签署知情同意书后，取其后背皮肤进行组织病理学检查，结果（见图1）提示:（背部皮肤）真皮层胶原纤维组织为主，见少量汗腺、毛囊，未见明显炎性细胞浸润、未见神经组织，请结合临床，必要时作基因检查。同时，采用EDTA抗凝采血管采集患儿及其父母静脉血5 mL，-20℃保存，采用血液提取试剂盒（百泰克，AU1802）提取血液DNA，采用Kapa二代测序文库构建试剂盒构建DNA文库，反应体系:离心KAPA高保真热启动准备体系（2乘）12.5μL，PCR探针1μL，Adapterligated library DNA 10μL，加水至总体积25μL，98℃预变性2 min，98℃变性30 s，65℃退火30 s，72℃延伸30 s，共5个循环；最后一个循环72℃延伸4 min（血液标本委托北京金准检验检测）。其父母非近亲结婚，家系调查见图2。基因分子遗传学分析结果（见图3）显示，内含子及外显子区域发现两处杂合突变c.851-33T>A，c.1958C>T。设计引物进行（表1）一代验证，结果提示患儿基因突变c.851-33T>A来自于父亲，c.1958C>T来自于母亲。其中c.851-33T>A杂合突变为文献报道的已知致病性突变[4-6]，c.1958C>T检索基因突变数据库及国内外文献未见报道，使用Polyphen预测软件该突变为可能有害，Mutation Taster和SIFT软件预测该突变为有害。