《表5 TA克隆数据统计:MEK抑制剂PD0325901显著提高猪胎儿成纤维细胞ssODN介导的HDR效率》
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《MEK抑制剂PD0325901显著提高猪胎儿成纤维细胞ssODN介导的HDR效率》
ssODN介导的HDR报告载体和相应ssODN共转染至PFF细胞,流式细胞术结果显示,25 nmol/L、50 nmol/L、100 nmol/L和250 nmol/L浓度PD0325901均能提高HDR效率,提高了32.3%~58.8%(P<0.05)(图3,A~C) 。X330-DMD-Cas9质粒和相应的ssODN共转染至PFF细胞后,用HindⅢ酶切方法评估DMD基因位点编辑效率。结果显示,25 nmol/L、50 nmol/L、100 nmol/L和250 nmol/L浓度PD0325901均能提高HDR效率,达2.6%~37.1%(图3,E和F),并表现明显的剂量依赖效应。共转染pX330-ROSA26-Cas9质粒和相应的ssODN,用HindⅢ酶切方法评估ROSA26基因编辑效率。结果显示,25 nmol/L、50 nmol/L和250 nmol/L PD0325901促进ROSA26位点HDR效率,分别提高了4.8%、0.8%和9.6%(图3,H和I),但100 nmol/L剂量时,ROSA26位点HDR效率略微下降。进一步利用TA克隆和测序验证,结果显示,在250 nmol/L PD0325901剂量下DMD和ROSA26基因位点的HDR效率分别提高了48.16%和17.64%(表5;图3,J和K),与HindⅢ酶切结果基本一致。
图表编号 | XD0045286700 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2019.04.01 |
作者 | 欧浩、李国玲、王豪强、黄广燕、蔡更元、李紫聪、吴珍芳、张献伟 |
绘制单位 | 华南农业大学动物科学学院国家生猪种业工程技术研究中心、华南农业大学动物科学学院国家生猪种业工程技术研究中心、华南农业大学动物科学学院国家生猪种业工程技术研究中心、华南农业大学动物科学学院国家生猪种业工程技术研究中心、华南农业大学动物科学学院国家生猪种业工程技术研究中心、温氏食品集团股份有限公司、华南农业大学动物科学学院国家生猪种业工程技术研究中心、华南农业大学动物科学学院国家生猪种业工程技术研究中心、温氏食品集团股份有限公司、华南农业大学动物科学学院国家生猪种业工程技术研究中心、温氏食品集团股份有限公司 |
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