《表4 PCR引物序列：MEK抑制剂PD0325901显著提高猪胎儿成纤维细胞ssODN介导的HDR效率》

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《MEK抑制剂PD0325901显著提高猪胎儿成纤维细胞ssODN介导的HDR效率》

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复苏后的PFF细胞培养至汇合度90%（10 cm板），用0.25%胰酶消化，分别共转染8μg/孔pX330-DMD-Cas9质粒和1μg/孔ssODN、8μg/孔pX330-ROSA26-Cas9质粒和1μg/孔ss ODN（序列见表3），每个处理设置3个重复。铺至6孔板培养24 h，加入2 m L/孔不同浓度梯度的培养基溶液，继续培养48 h。抽提细胞总DNA，PCR扩增目的基因序列（引物序列见表4）。回收纯化后分别使用T7 EndoⅠ和HindⅢ酶切，进行琼脂糖凝胶电泳分离，灰度扫描电泳条带，根据公式:同源定向修复效率=HindⅢ条带灰度值/T7 EndoⅠ条带灰度值，计算同源定向修复效率。同时按照中美泰和生物技术有限公司clone smarter TA克隆试剂盒（产品编号C5853）说明书，对纯化的DNA进行TA克隆测序，计算同源定向修复效率。