《表2 21株参考毒株E2基因的序列表》

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《某猪场猪瘟典型病例综合诊断及病毒E2基因分析》

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将经过PCR鉴定为CSFV E2阳性的病料匀浆液上清经0.22μm滤器过滤后，接种于密度约70%的单层PK-15细胞中，36 h后收毒检测。继续接毒于密度约70%的单层PK-15细胞传代。盲传三代收毒，将细胞及上清按上述方法提取核酸后，进行PCR鉴定。将鉴定为阳性的核酸利用CSFV E2引物进行E2基因全长的扩增。将扩增产物进行胶回收、连接p EASY-T1 Simlie Cloning Vector载体、转化Trans1-T1感受态细胞及增菌培养，最后将鉴定为E2基因阳性的菌液送到生工生物工程（上海）股份有限公司测序。利用Lasergene7.1软件对本研究中分离到的毒株和Gen Bank中录入的CSFV参考毒株的E2基因进行核苷酸序列比对分析，以便得出分离毒株的序列特征。同时，我们构建了E2基因遗传进化树，比较分离株与参考株亲缘关系的远近。本研究序列分析所用到的Gen Bank中收录的21株参考毒株见表2。