《表1 单细胞分离技术：单细胞技术在干细胞组织修复与药物研发中的应用》

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《单细胞技术在干细胞组织修复与药物研发中的应用》

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单细胞技术首要解决的问题是如何获得单细胞。从大量的细胞中获取单细胞主要采取以下几种分离方法（表1）。口吸管（mouth pipette）分离法操作简单，对细胞损伤小，但无法分辨细胞类型。显微操作法（micromanipulation）直观、肉眼可见，但对技术人员和机器的要求高。有限稀释法（limited dilution）操作简单，但是得到的实验结果有可能是假阴性、假阳性。免疫磁珠分离技术（magnetic activated cell sorting，MACS）可以通过特定的抗体富集目标细胞，广泛应用于稀少细胞，如CTC。荧光激活细胞分选（fluorescence activated cell sorting，FACS）通过特异性的荧光标签分离细胞，但是FACS的缺点是需要大的起始量，使一些小体积或微量样本受到了制约，微流控技术（microfluidic）的出现是对FACS很好的补充。微流控技术能够从少量样本中根据细胞表面标志物分离特定的细胞，反应速度快，可运用于稀有细胞的筛选、基因测序、单细胞分析等多个方面，尤其是稀有细胞的单细胞测序。然而，以上技术都只能在解离的细胞悬液中运用，无法判断细胞在组织中的位置，激光捕获显微切割（laser capture microdissection，LCM）技术解决了这个难题，但是要求操作者要非常小心，避免对染色体造成损伤从而影响后续的结果。FOCOT（facile one-cell-one-tube）技术通过微流控技术和液滴显微光学成像识别技术，分选出包裹单细胞的液滴，快速实现单个细胞的分离[4]。这些单细胞分离技术各有利弊，应当根据实际具体情况进行选择合适的方法。