《表1 单细胞分离技术优缺点比较》

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《单细胞基因组测序技术新进展及其在生物医学中的应用》

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单细胞测序首先需要获取感兴趣的单细胞样本。研究中通常采用机械剪切结合酶解方法将组织消化成单细胞悬液，单细胞消化过程为了避免消化不充分从而导致细胞类型不均一，通常采用多种水解酶混合使用，单细胞样本的回收根据实验需要选择合适的技术平台（表1）。使用口吸管[3]或显微操作仪（micromanipulation）[4]回收单细胞，可以借助显微镜直观的观察目标单细胞，可视化、准确、回收成功率高，但对操作人员技术要求较高，单细胞回收通量比较低。口吸管或显微操作技术适用于目标细胞较少且珍贵样本，如循环肿瘤细胞或辅助生殖移植前胚胎细胞。流式细胞分选技术（fluorescence activated cell sorting，FACS）[5]的应用非常广泛，FACS可以高通量、高效的将目标单细胞样本回收到96孔板或384孔板中，与高通量、标准化实验操作兼容。如果借助荧光标记的单克隆抗体可以标记细胞亚群，FACS还可以有选择的回收某一特定类型单细胞。缺点是FACS对细胞有一定损伤，对起始细胞数量有一定要求，细胞数量较少的细胞亚群或珍贵样本不适合使用FACS进行单细胞回收。激光显微切割捕获技术（laser-capture microdissection，LCM）[6]通常被用于分离回收固定染色切片上的目标细胞样本，LCM技术的优点是可以确定单细胞在组织样本中的空间位置，但设备操作者需要对组织样本非常熟悉，因为是从组织原位回收目的细胞，需要操作者分辨出目标细胞和非目标细胞[7]，对操作者技术要求也比较高，LCM是唯一能够获取目标细胞空间位置的技术。微流控芯片平台[8，9]用于单细胞回收的优点是通量高，效率高，自动化程度高，能够与下游分子生物学反应集成化，全部在微流控芯片上完成，降低污染，降低人为操作导致的实验偏差，反应体积小，反应效率高，节约试剂使用量，但微流控平台对技术要求比较高，如果自己搭建微流控芯片平台很多普通生物学实验室没有相关技术支持，使用全自动商业化仪器，设备成本较高。