《表2 重组菌生产性能及PGL基因拷贝数》

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《组合策略促进碱性果胶酶在毕赤酵母中高效表达》

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将Bacillus sp PGL基因克隆至pPIC9K中的Eco R I-Not I位点，构建得到PGL表达质粒pPIC9K-PGL（图2 （a）） ，转化P.pastoris GS115（his-）得到重组菌GS115/PGL转化子，经MD/MM平板筛选Mut+/Muts菌株，获得表型为Mut+的数十株菌株，再经不同浓度梯度G418平板筛选，从1～4 mg/m L平板上各挑取10个单菌落进行摇瓶发酵96 h。其中，菌株GS115/PGL 9#、14#和19#胞外酶活分别为256.35、301.32 U/mL和273.24 U/mL。重组菌株PGL基因拷贝数使用RT-PCR进行确定（表2），PGL拷贝数为3时重组菌株具有最佳的PGL表达能力。未经密码子优化的PGL基因克隆至pPIC9K中的Eco R I-Not I位点得到pPIC9K-PGLN，转化P.pastoris GS115（his-）得到含3个拷贝数PGL基因的重组菌GS115/PGLN。在相同拷贝情况下，GS115/PGL 14#较GS115/PGLN胞外PGL酶活提高25.1%，表明密码子优化能有效提高PGL在P pastoris分泌表达。