《表2.与文献比对确认sgm A的NMR碳谱归属 (在DMSO-d6溶剂中检测)》

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《非核糖体多肽Surugamides生物合成基因簇镶嵌式结构的解析》

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为了确认镶嵌于sgm基因簇内部的surB和surC基因仅负责sgm F的生物合成而与sgm A无关，构建了用于缺失基因surB和surC的同源重组双交换载体pRJ26，同时在该同源交换臂中间装载了组成型强启动子ermEp*，使得缺失surB和surC的同时在surD基因阅读框前面引入强启动子ermEp*（图5-A）。通过双亲接合转移把pRJ26导入宿主菌LHW3101后筛选同源重组双交换突变株。用引物surBC-2S和surBC-2A对候选突变株进行PCR筛选，双交换突变株PCR目标产物为1122 bp（图5-B左），野生型的PCR目标产物因理论长度为39 kb所以无法扩增出产物，同时用引物ermp-sur-A和ermp-sur-S进一步验证ermEp*已引入surD基因前，目标产物为212 bp（图5-B右），经过测序确认两对引物验证突变株的PCR产物，最终获得突变株RJ9。LC-MS分析RJ9液体发酵乙酸乙酯萃取物发现化合物sgm F不再产生，而sgm A的产量提高到野生型产量约2倍水平（图5-C）。