《表1 亲和层析参数筛选试验因素及水平设计Tab 1.Factors and levels for screening of parameters of affinity chromatography

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《重组抗CD52单克隆抗体亲和层析纯化工艺的优化》


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采用DOE方法对Mabselect SuRe亲和层析参数进行筛选,通过DOE的中心复合表面(Central Composite Face,CCF)设计及二次方(quadratic)模型,共进行11次亲和层析纯化,包括3次中心点重复,考察亲和层析中间清洗液NaCl浓度在130~870 mmol/L、洗脱液pH在3.50~4.20之间变化对纯化后重组抗CD52单克隆抗体样品纯度、收率、残余宿主蛋白、外源DNA及蛋白A含量的影响,试验因素及水平设计见表1。检测结果输入Avant层析系统的Unicore 6.1软件,经DOE模块构建数据模型并进行分析,预测各响应值符合预期情况下中间清洗液NaCl浓度和洗脱液p H的参数范围。模型方差分析中,当模型的回归P<0.05且模型失拟P>0.05时,表明参数的模型与检测结果之间拟合较好。模型参数分析中,R2代表当前数据与模型是否拟合,应>0.75;Q2代表模型与数据的可预测性,应>0.50;模型有效性(model validity)代表模型误差(model error)和纯误差(pure error)间的关系,应>0.25;重现性(reproducibility)代表纯误差,应>0.50[6]。