《表1 DNA文库构建试剂盒的特征比较》

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《全基因组测序与生物信息学分析在细菌耐药性研究中的应用》

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目前市面上存在很多商业化的DNA文库构建试剂盒，随着试剂盒的快速更新换代，其价格下降的同时文库质量在提高，并且初始DNA量的要求也在降低。尽管如此，一个重要的原则是DNA初始量越大，后续需要扩增的循环越少，得到基因组信息越接近真实。KAPA Hyper Prep Kit Illumina?platforms（Kapa Biosystems，Wilmington，MA）试剂盒在DNA初始量足够的情况下可实现无PCR扩增完成DNA文库的构建。众多的商业化试剂盒中均有详细的流程，在具体过程中有些许差别，在此我们仅对几款运用广泛的试剂盒在关键的几个步骤上进行整体的比较（表1）。末端修复、加A尾、接头连接以及PCR扩增是DNA文库构建中关键的步骤，其中主要的优化程序是将末端修复和加A尾这两步进行合并以缩短总体的时间。然而只有少部分如Truseq?DNA PCR-free和KAPA的两款试剂盒可以做到PCR-free，这不仅能减少文库构建时间，也能最大程度地保证DNA的真实性，减少PCR扩增带来的偏差。此外，磁珠纯化是各类试剂盒中不可缺少的步骤，该步骤费时费力，且磁珠的价格昂贵，若能在此步骤上进行优化将会对DNA文库的构建效率有很大的提高。