《表3 回归模型方差分析》

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《Box-Behnken设计-响应面法优化猪源纤维蛋白原冻干保护剂》

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注:P>0.0500，表示不显著；P<0.0500，表示显著（*）；P<0.0100，表示极显著 （**）

根据单因素试验结果，选择蔗糖、精氨酸、白蛋白作为3个试验因素进行Box-Behnken设计（表1）。利用Design Expert 8.05b软件对响应面试验数据进行分析，得回归模型方差分析结果（表2），以“归一值”OD值为响应值，本试验OD值越大，说明性能越优良。各因素经回归拟合之后，得到方程:OD=-4.87+0.15×A+0.44×B+1.25×C-（3.96E-003）×A×B-0.01×A×C-0.06×B×C-（2.09E-003）×A2-（1.79E-003）×B2-0.07×C2。根据回归模型方差分析，其中P<0.001，表明模型具有极显著差异性，模型有效；失拟项P>0.05，表明模型没有明显失拟现象。本文的P<0.001，表明模型具有极显著差异性；失拟项P>0.05，失拟项不显著，说明该模型拟合度和可信度均有效，试验误差小，可以用此模型对纤维蛋白原冻干粉的配方优化进行分析和预测。由表3回归模型方差分析结果可知，3因素均对OD有影响，精氨酸的影响最显著，表现为PB<0.0001，等高线更为陡峭；蔗糖、白蛋白次之，表现为PA>0.5、PC<0.001，等高线曲线较为平滑。根据回归方程，作出不同因子间对响应值影响的三维效应曲面图，由图4效应曲面图可以看出，各因素交互显著，B、C对OD值有极显著影响。随着精氨酸含量的逐渐变大，OD值逐渐增大；随着蔗糖含量的增大，OD值先变大后变小，表明精氨酸含量影响因素较大。适当增大蔗糖含量能在干燥阶段提高纤维蛋白原冻干粉质量，蔗糖有一个相对较高的玻璃化转变温度，使其在冷冻状态下与蛋白质共浓缩，起到了稀释蛋白质的作用，从而防止了聚合，并且维持蛋白分子的结构；而糖类对蛋白质的保护作用大小有时依赖于其浓度，浓度过高反而影响其冻干效果，冻干后残留水分含量可能超过规定值[20]。白蛋白升高，OD值先升后降，因为白蛋白含量过低，纤维蛋白原易在干热灭活过程中萎缩，白蛋白含量升高后此现象好转；当白蛋白含量超过6 g·L-1时，影响纤维蛋白原冻干粉的复溶效果，出现有不溶的絮状物，纤维蛋白胶被测弹力时易断。