《表1 不同基因检测引物序列》

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《Urantide对急性肝衰竭小鼠肝组织p120-catenin表达的影响》

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取50～100 mg肝组织，采用TRIzol处理，总RNA的提取按照试剂盒说明书进行操作。2μg总RNA作为模板用于第1链cDNA合成（5×PrimeScript RT Master Mix 2μL，以无核酸酶水补至终体积10μL，37℃孵育15 min，95℃加热5 s，将cDNA置于-20℃保存）。引物设计借助于Primer Premier 6.0软件设计，基因检测引物序列和产物长度如表1。Realtime PCR操作方法按照试剂盒说明书进行:2×Premix Ex TaqTMⅡ10μL，上、下游引物各0.4μL，ROX Reference DyeⅡ0.4μL，DNA模板2μL，加灭菌蒸馏水至20μL，建立反应体系。在ABI7500仪器按照两步法进行扩增:第1步:50℃2 min，1个循环；第2步:95℃5 min，40个循环。GAPDH作为内参照。检测结束后，得到每个样本的CT值，按照2-ΔΔCT公式计算各组mRNA相对表达量定值。