《表1 TLR4基因PCR检测引物序列》

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《TLR4~(-/-)DF1细胞系感染NDV后免疫机制的初步研究》

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鸡TLR4为I型跨膜蛋白，分为胞外、胞内和跨膜3个部分。利用哈佛大学张峰实验室提供的网站（http://crispr.mit.edu）在胞外区的第二外显子处选择得分较高、特异性较好的2条sg RNA，并命名为TLR4-sg RNA1和TLR4-sgRNA2，在正义链模板的5'端添加CACC，反义链模板的5'端添加AAAC，与BbsⅠ酶切后形成的黏性末端互补。并根据敲除靶点位置设计PCR鉴定引物chTLR4-S。由于CRISPR/Cas9系统在非靶位点发生错配也有发生切割的可能性称为脱靶（Off-target）。根据网站提供的潜在脱靶位点设计合成3对鉴定引物TLR4-OT-1、TLR4-OT-2和TLR4-OT-3。表1为设计的PCR检测引物序列。