《表4 酶解时间对原生质体产量的影响》

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《一种有效的嗜热真菌杜邦嗜热菌靶向基因替代系统》

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注:采用Duncan法分析了数据间差异显著性（P<0.05）Note:Significant difference analysis according to Duncan’s test（P<0.05）.

选用相同的菌丝体量、酶浓度，研究了不同的酶解时间对菌丝体酶解进行原生质体制备的影响（表4），随着酶解时间的延长，原生质体的产量逐渐增加，酶解时间在5–6h时，原生质体产量较高（2.5?107–3.3?107个/mL），至6h时达到最高值（3.3?107个/mL）。但在真菌转化实验中，使用酶解时间为5.5h时所得原生质体进行转化后生长的转化子数约为10个/μg DNA，而使用酶解时间为6h时获得的原生质体转化后生长的转化子数约为3个/μg DNA，即酶解时间为5.5h时获得的原生质体转化后所得的转化子数明显多于酶解时间6h所得。这可能是由于酶解时间超过5.5h后，会对原生质体质量造成一定破坏，这一结论与其他相关文献报道的常温真菌（青霉和曲霉）酶解时间通常为2–4h（沈慧敏等2017）、嗜热真菌疏绵状丝孢嗜热菌为4–6h（韩华2012；杨欢2017），时间过长会对原生质体造成过度破裂和损伤，影响再生效果的实验结论相一致（彭轶楠等2017；张雷刚等2018）。因此本实验选择5.5h作为获取嗜热真菌杜邦嗜热菌原生质体的最佳酶解时间。