《表1 LjCyp1B和LjCyp5B的半胱氨酸蛋白酶活分析》

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《百脉根半胱氨酸蛋白酶基因在根瘤衰老过程中的表达分析》

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注:本研究将每克蛋白酶单位时间内水解底物的能力作为蛋白酶活性测定的指标。Note:In this study，the ability to hydrolyze substrates per gram of proteinase in one minute was used as an indicator of protease activity determination.

设计特异性引物扩增出无抑制结构域的LjC-yp1和LjCyp5部分基因片段，并分别命名为LjC-yp1B和LjCyp5B。将去抑制结构域片段连接到带有His标签的pET-28a载体上，将重组质粒转化到大肠杆菌BL21-DE3中表达并纯化得到目的蛋白LjCyp1B和LjCyp5B。通过荧光法测定蛋白酶活性，并加入半胱氨酸蛋白酶抑制剂E-64观察对蛋白酶活性的影响[10]。结果显示:LjCyp1B和LjCyp5B能分解底物Z-phe-arg-AMC并释放荧光物质AMC聚合体；当加入了抑制剂E-64后，LjCyp1B和LjC-yp5B的蛋白酶活性受到了抑制（表1）。表明LjC-yp1B和LjCyp5B具有半胱氨酸蛋白酶活性，LjC-yp1和LjCyp5是2个半胱氨酸蛋白酶。