《表2 抗稻瘟病基因的SSR分子标记引物》

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《重庆自育水稻骨干亲本稻瘟病抗性评价及其抗病基因分布分析》

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取水稻骨干亲本分蘖期的嫩绿叶片3～5片，采用改良的CTAB法提取基因组DNA。利用抗稻瘟病基因Pi2、Pi5、Pi9、Pi-kh、Pib、Pita和Pik-m1的连锁SSR分子标记引物（表2）进行PCR扩增。PCR反应体系10.0μL:DNA模板1.0μL、1.0μL 10×PCR缓冲液（含MgCl2）、10 mmol/L引物1.0μL、2.5 mmol/L dNTPs 0.5μL、5 U/m L Taq DNA聚合酶0.5μL，ddH2O补足至10.0μL。扩增程序:95℃预变性5 min；95℃30 s，55℃30 s，72℃30 s，进行35个循环；72℃延伸10 min。PCR产物加入2.0μL上样缓冲液充分混匀后，以1.2%琼脂糖凝胶电泳进行检测，取出后放入含溴化乙锭的0.5×TBE缓冲液染色3～5 min，最后用凝胶成像系统扫描记录结果。