《表2 极差分析：应用正交实验法优化大肠杆菌表达CTB-PSMA624-632蛋白的条件》

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《应用正交实验法优化大肠杆菌表达CTB-PSMA624-632蛋白的条件》

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为了分析选定的5因素对目的蛋白CTB-PS-MA624-632（13.1 kD）的表达量的影响情况，设定了4个水平，采用L16（45）正交实验表（表1），每组实验后留样，将16组样进行SDS-PAGE电泳（图2），用Alpha FluorChem成像分析系统计算出各组目的条带的表达量（表1）。从表中可以看出，实验组别2和3的目的蛋白的表达量较高，在17%以上，而第1组的表达量仅有0.48%，说明各因素的改变对CTBPSMA624-632蛋白的表达是有影响，需要进一步的探讨。极差分析各组目的条带的表达量，结果列于表2中，其中Ki这一行的数分别表示各因素的第i水平所对应的目的蛋白的表达量之和。ki为i水平的平均值，将各因素（分别用ABCDE表示）与ki值做了相应的折线图（图3），从图中可以看出最佳的正交组合为A2B3C3D2E3。R值代表极差，极差数据得出影响大小顺序为诱导时间>诱导转速>诱导温度>IPTG终浓度>预培养时间（表2）。其中IPTG终浓度和预培养时间对表达量的影响较小，从生长曲线图可以看出两小时的预培养时间仍处于缓慢期到对数的初始期，菌体在适应新环境，繁殖速度不快，因此对表达量的影响不大。而诱导剂IPTG作为β-半乳糖苷酶底物的类似物，诱导力强，与阻遏蛋白结合后就不再与O基因结合，从而促进基因的表达（金元昌等，2006），因此还需采用单因素探讨不同IPTG终浓度对表达量的作用效果。