《表6 5因素4水平的CTB-PSMA624-632蛋白表达的正交实验》

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《应用正交实验法优化大肠杆菌表达CTB-PSMA624-632蛋白的条件》

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由于诱导蛋白的表达量受很多因素的影响，且同一因素的不同水平对其结果也是不同的，为了更全面考察参数的影响，采用了正交实验法。一般认为，在菌种生长的对数前期诱导有利于提高表达量。在一定范围内温度越高，包涵体的表达量越多。蛋白的诱导时间也对表达量有一定的影响，诱导时间太短，则表达量少，太长则容易被蛋白酶降解。诱导中使用到的诱导剂IPTG是β-半乳糖苷酶底物的类似物，通过与阻遏蛋白结合成复合物，使阻遏蛋白构象发生改变，不能与O基因结合，从而促进基因表达（丁军颖等，2012）。本实验以预培养时间（h）、诱导时间（h）、诱导温度（℃）、IPTG终浓度（滋mol/L）、诱导转速（r/min）作为实验因素，依据菌株生长曲线及试剂使用浓度较优范围进行了正交实验的分配制成了各因素水平（表6），并且以灰度值、极差分析数据及OD600值作为考察指标。