《表3 细调型目的蛋白表达因素的3因素3水平正交实验》

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《应用正交实验法优化大肠杆菌表达CTB-PSMA624-632蛋白的条件》

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根据上述极差分析的结果，需对诱导时间、诱导温度、诱导转速进行细调型的正交实验，为了分析这3个因素对目的蛋白CTB-PSMA624-632（13.1 kD）的表达量的影响情况，分别设定了3个水平列（表3），采用表4的L9（33）正交实验表，每组实验后留样，将9组样进行SDS-PAGE电泳（图5），用Alpha FluorChem成像分析系统计算出各组目的条带的表达量（表4）。结果显示，第2组的培养条件比较理想，CTB-PSMA624-632蛋白的表达量最高达到18.14%，对应的优化条件分别是诱导时间5 h，诱导温度37℃，转速240 r/min。相比于前面的16组正交实验，经过细调的条件总体的蛋白表达量都有所增加，均在14%以上，且各组的差距没有前面的大，说明优化的条件更有利于CTB-PSMA624-632蛋白的表达。从极差分析各组目的条带的表达量的数据看出，细调后的诱导时间对CTB-PSMA624-632蛋白的影响较小，其次是转速和诱导温度，因此在诱导表达的过程中，要严格控制好温度，这对提高表达量有很大的影响（表5）。