《表1 Cs FT1与CsFT2克隆引物序列》

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《甜橙成花关键基因CsFT的克隆分析与表达载体构建》


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由华中农大数据库(http://citrus.hzau.edu.cn/cgibin/orange/search)中搜索获得了包含完整开放阅读框(ORF)的CsFT基因拼接序列,利用软件Primer 5.0设计引物(表1),送往上海生物工程有限公司合成。PCR反应程序如下:95℃5 min;94℃变性10 s,45℃10 s,72℃延伸1 min,循环35次;72℃10 min。之后使用凝胶电泳观察条带大小,利用DNA回收试剂盒(天根生化科技服务有限公司)将PCR电泳产物目的片段经回收、纯化,连接至18-T载体,培养16 h,进行蓝白斑筛选挑出单菌落。经菌液PCR鉴定为阳性克隆的菌液后取1 mL菌液送至上海生物工程技术有限公司测序。