《表1 象草差异表达基因qRT-PCR引物》

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《基于转录组测序分析象草木质素合成的研究》


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分别提取、纯化eg7和eg87两个材料茎段的RNA,采用RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit(Fermentas)合成cDNA第一链。选取9条木质素单体合成候选unigene,象草elongation factor 1a(CpEF1a)和actin(CpActin)作为内参基因,设计qRT-PCR引物,引物序列见表1。利用LightCyclerR480fluorescence real time PCR machine(Roche)完成荧光定量PCR实验,PCR程序为:95℃预变性10min;40个循环(95℃变性15s,60℃退火20s,72℃延伸40s,80℃1s收集荧光,读板);之后72℃延伸10min,最后从65℃开始,以每步0.5℃的速度升高至95℃,每个温度保持1s,绘制溶解曲线。每个样品3个生物学重复。