《表1 RT-PCR引物序列》

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《索拉非尼联合贝伐单抗对小鼠宫颈癌细胞株U14移植瘤抑制作用的研究》

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注：VEGF为血管内皮生长因子；BAX为B细胞淋巴瘤/白血病-2基因相关X蛋白

采用RT-PCR法。先进行组织的裂解：剪取瘤体组织到均质管中，加入350μl裂解Buffer RL（已加入50×DTT Solution），均质机上破碎裂解。分别收集4组肿瘤细胞，总RNA提取操作按照Ta Ka Ra Mini BEST Universal RNA Extraction Kit说明书进行。再将提取的RNA置于RT反应液进行反转录反应，条件为37℃15 min，85℃5 s，获得c DNA保存于-20°C冰箱备用。选用生工生物工程（上海）有限公司设计并合成的RT-PCR引物序列，PCR反应操作按照Ta Ka Ra荧光定量试剂盒SYBR Premix Ex TaqTMⅡ（Perfect Real Time）进行，将获得的c DNA用RT-PCR仪进行扩增，引物序列见表1。扩增反应条件为：预变性95°C 3 min；40个循环（95°C10 s，60°C 30 s）；溶解曲线：从55°C开始，每30 s升高0.5°C，直到95°C，循环1次。所有反应信息资料由ABI Step One Plus PCR仪收集，Ct值通过计算机软件来测量和计算，转录水平通过公式2-ΔΔCt计算。