《表1 引物序列：嵌合蛛丝蛋白Flag-MaSp1重复模块的表达及二级结构分析》

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《嵌合蛛丝蛋白Flag-MaSp1重复模块的表达及二级结构分析》

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注:atcg为保护碱基，AGATCT、CTCGAG、ACTAGT、GGATCC分别为BglⅡ、XhoⅠ、SpeⅠ和Bam HⅠ的酶切位点。

以p GHSc Rp1质粒（含FlagR序列）为模板，表1中的Flag-P1及Flag-P2为引物，PCR扩增得到FlagR片段。PCR条件如下:95℃预变性5 min；95℃变性30 s，65℃退火30 s，72℃延伸30 s，72℃补平10 min，循环数30个。对PCR产物进行BglⅡ和XhoⅠ双酶切，对本课题组改造的p ET-32a表达载体p EHS（含6×His-SUMO标签)及上述获得的FlagR片段同时进行Bam HⅠ和XhoⅠ双酶切，使用T4 DNA连接酶将片段和载体相连接，得到过渡质粒p EHS-FlagR。根据大腹园蛛（Araneus ventricosus）Ma Sp1的m RNA序列(Gen Bank登录号:JN857964.2），取一个长696 bp、编码232个氨基酸的完整重复区，记作Ma Sp1R，对完整序列进行大肠杆菌密码子优化后委托上海捷瑞生物工程有限公司进行全基因合成，并在两端加入Bam HⅠ和SpeⅠ酶切位点。对合成质粒p GH-Ma Sp1R及过渡质粒p EHS-FlagR同时进行Bam HⅠ和SpeⅠ双酶切，随后连接得到重组质粒p EHS-FlagR-Ma Sp1R。