《表1 T0代转基因植株的靶位点突变率》

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《利用CRISPR/Cas9定点编辑技术创建水稻长链基激酶突变体oslcbk1和oslcbk2》

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潮霉素筛选获得T0代转基因植株，水培炼苗后移入栽培桶。种植2个月后，以CTAB法提取单株转基因植株的基因组DNA，用相应的基因特异测序引物进行PCR扩增后，测序分析靶位点的突变情况。结果显示（表1），本实验中针对Os LCBK1和Os LCBK2设计的靶向序列均能诱发60%以上的T0代植株发生突变。进一步分析T0代Os LCBK1和Os LCBK2单基因和双基因突变植株靶位点的基因型，结果发现，基因组编辑系统引起的碱基编辑类型有多种模式，包括多个碱基插入和缺失、单碱基插入、杂合突变和双等位突变等。Os LCBK1和Os LCBK2单基因发生编辑的植株中，叠峰杂合突变的发生频率最高，分别是42.9%和70%；其次是叠峰双等位突变，发生的频率分别是28.6%和30%；纯合突变的发生频率分别是28.6%和0 （表1）。