《表2 限制性内切酶反应体系及酶切产物大小》

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《雌激素受体α PvuⅡ、XbaⅠ位点多态性与壮族男性生育力的相关性分析》

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聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）引物的设计由宝生物工程（大连）有限公司合成，PCR扩增反应体系、反应条件以及限制性片断长度多态性（RFLP）反应体系及反应条件，见表1。建立20μL PCR体系，包括1μL模板DNA，10μL高保真2×Gold Star Taq Master Mix（大连Ta Ka Ra），正、反向引物各1μL，双蒸水7μL。反应条件为:95℃预变性5 min；95℃变性30 s，56℃退火30 s，72℃延伸30 s，共35个循环；72℃10 min，见表2。将扩增得到的PCR产物用于酶切（NEB北京），酶切产物用2%琼脂糖凝胶电泳检测，见图1。为确保基因分型结果的可靠性，采用单纯随机法对样本进行测序验证，测序工作由生工生物工程（上海）股份有限公司完成，见图2、图3。