《表1 PGC-1αshRNA单核苷酸序列表》

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《PGC-1α敲降对斑马鱼细胞冷应激过程的影响》

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首先在NCBI网站上对斑马鱼PGC-1α编码区序列进行全序列分析，根据shRNA序列设计原则，在Life Technology网页上进行PGC-1αshRNA设计。正义链：5'CCGG-21 bp sense-CTCGAG-21 bp antisense-TTTTTG 3'；反义链：5'AATTCAAAAA-21 bp sense-CTCGAG-21 bp antisense 3'（牛虹博等，2017）。在PGC-1αCDS区第165位、第457位、第1486位、第2487位碱基处设计4个不同的靶点，长度为21 bp，分别命名为shRNA-1、shRNA-2、shR-NA-3、sh RNA-4，并设计一个不起任何作用的茎环（loop）结构作为阴性对照shNC。PGC-1αshRNA首尾分别含有限制性内切酶AgeⅠ、Eco RⅠ的酶切位点，中间由一回文序列CTCGAG构成短发夹结构，回文序列的两端为长21 bp的PGC-1α靶序列，并且反向互补，在PGC-1α靶序列后连接5～6个胸腺嘧啶T，反义链对应的为5～6个A做为转录终止的信号（表1）。