《表1 两种细菌固定处理结果的假设检验》

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《基于液相PNA-FISH技术的单增李斯特菌检测方法研究》

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注：A：原始浓度菌液；B：稀释2倍；C：稀释3倍；D：稀释5倍；E：稀释10倍。

通过对平板计数法计算得到单增李斯特菌ATCC 10890菌液原始浓度为6.2×109cfu/m L。对5个不同浓度的单增李斯特菌样品分别采用80%酒精加PBS和50%酒精加4%多聚甲醛两种杂交前细菌固定方式，检测荧光强度（图1）。结果显示，随着菌液浓度降低，阳性对照探针组与特异性探针组的杂交荧光值均随之降低且两种探针间无明显差异。两种细菌固定方法间的F检验和t检验均通过SPSS统计软件实现，结果显示，5个不同浓度单增李斯特菌样品F检验的p值均大于0.05，两种固定方法对每个浓度菌液杂交荧光值均呈现方差齐性，离散程度低，不存在统计学上的显著性差异，可靠性达95%，可进行t检验；对单增李斯特菌原液、稀释2倍、稀释3倍、稀释5倍、稀释10倍4个浓度样品t检验，两种固定方法对原浓度菌液稀释直至5倍时的荧光检测结果均在95%置信区间内，不存在显著性差异（p>0.05），而浓度稀释10倍的单增李斯特菌样品p值为0.024，小于0.05，该浓度下两种固定方法存在显著性差异（表1）。其原因可能是由于稀释倍数过高，菌量不足以达到仪器检出水平。以上实验结果表明，不同单增李斯特菌样品经过增菌处理，当用于杂交的菌量大于109cfu时可采用80%酒精加PBS的杂交前处理方法，减少多聚甲醛的使用及其对实验人员造成的健康危害。