《表1 引物序列：乙酸钠、烟酸对红曲菌白色变种产Monacolin K的影响》

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《乙酸钠、烟酸对红曲菌白色变种产Monacolin K的影响》

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在固态培养基上取适量的红曲菌菌丝体，用试剂盒提取RNA并检测浓度。以RNA为模板，反转录合成c DNA，用于进行RT-q PCR实验。采用18S r RNA基因作为内参基因，以第3天对照组红曲菌mok A-mok I基因的转录水平作为对照，进行Monacolin K合成相关基因相对转录水平测定。通过软件设计基因引物，如表1所示。RT-q PCR反应体系：2×Universal SYBR Green Fast q PCR Mix 10μL，c DNA 0.5μL，上、下游引物（1.0μmol/L）各0.4μL，加dd H2O至总体系20μL。每个样品做3个平行实验。RT-q PCR反应条件：95°C 3 min；95°C 5 s，60°C 30 s，共循环40次。每个反应设计3个平行。通过Step One Software软件，采用2-ΔΔCt相对定量分析法，对酸式Monacolin K合成相关基因转录水平进行分析，式中ΔCt=Ct-Ct18S r RNA gene，ΔΔCt=ΔCt实验组-ΔCt对照组。