《表1 产甲烷菌qPCR分析引物序列》

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《UASB启动运行特征及互营丙酸氧化菌定量分析》

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根据Pelotomaculum、Syntrophobacter和Smithella中已鉴定物种的16S rRNA基因序列设计特异引物[8-9].产甲烷菌的定量分析在属水平上进行，引物序列见表1.本研究中实时荧光定量PCR分析采用绝对定量方式.标准样品为包含目的基因片段融合质粒，用超纯水进行10倍梯度稀释（101～107）.标准样品和待测样品同时进行qPCR扩增.qPCR在荧光定量PCR系统（Model 7500，ABI，USA）中完成.所用荧光染料为SYBR green I.反应体系和反应程序参考以前的研究[8].每个样品设置3个重复.以达到对数增长时的循环数（Ct值）为横坐标，标准质粒数目的对数值为纵坐标绘制标准曲线（图1）.