《表1 产甲烷菌及总菌定量引物》

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《产甲烷菌抑制剂对便秘小鼠结肠微生物菌群及代谢产物的影响》

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使用ABI 7500 Real-time PCR仪对小鼠结肠内容物中总细菌和产甲烷菌进行定量分析.分别以产甲烷菌和总菌的16S rRNA基因作为模板制作相应细菌定量的标准曲线，引物见表1.测定总菌基因拷贝数的反应程序为95℃3 min，而后95℃15 s，56℃30 s及72℃30 s共40个循环.测定产甲烷菌基因拷贝数的反应程序为95℃2 min，而后95℃15 s，60℃1min共40个循环，每个循环变性和延伸步骤进行荧光检测.扩增产物特异性用ABI 7500荧光定量PCR仪自带溶解曲线检测.扩增产物随后用1.5%琼脂糖凝胶电泳进一步检测扩增特异性.