《表3 梯度稀释的创伤弧菌纯菌液ddPCR定量检测结果》

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《水产品中创伤弧菌ddPCR定量方法的建立》

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创伤弧菌（ATCC 27562）的过夜培养菌悬液经平板计数测得其浓度为1.3×109 CFU/mL，其对数值为9.11。经超微量分光光度计测定，其原始菌液DNA质量浓度为413.6 ng/μL，代入1.3.3节公式算得基因组DNA浓度为7.6×107拷贝数/μL，按照1拷贝基因组对应1个CFU菌落，则原始菌液浓度为3.8×109 CFU/mL，其对数值为9.57。取各稀释度菌液DNA同时进行ddPCR和real-time P C R检测，结果发现d d P C R可检测到1 0-8稀释度（图2A），而real-time PCR仅检测到10-7（图2B）。ddPCR在10-2稀释度达到检测上限，阳性微滴的比率达100%，ddPCR的定值动态范围为10-3～10-7稀释度（图2A，表3），由不同稀释度菌液计算出原菌液中创伤弧菌met基因含量的对数平均值为9.46，同核酸蛋白分析仪及平板计数法测得值均非常接近，分别相差了0.11、0.35个对数值（图3）。