《表4 ddPCR与real-time PCR对人工污染牡蛎样品中创伤弧菌的定量检测结果》

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《水产品中创伤弧菌ddPCR定量方法的建立》

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取10-7～10-4稀释度创伤弧菌ATCC 27562纯菌液添加到牡蛎样品中制成人工污染阳性样本。根据添加菌液的平板计数结果，预计污染样品中创伤弧菌含量为9.2×101～9.2×104 CFU/g。real-time PCR检测扩增曲线如图4A所示，根据Ct值和得到的标准曲线计算污染样品中创伤弧菌平均含量分别为415 400、29 102、1 954、165拷贝数/g（表4）。而ddPCR检测结果显示，随着污染水平的下降，阳性微滴数量逐渐减少（图4B），由QuantaSoft软件计算测定的创伤弧菌含量分别为133 200、11 610、1 210、113拷贝数/g（表4）。经过t检验，real-time PCR和ddPCR的定量结果在10-7菌液污染样本中无显著性差异（P>0.05），而其余3个高水平（10-6、10-5、10-4稀释度）污染样本中2种方法定值结果存在显著性差异（P<0.05）。经线性回归分析，发现ddPCR的定量结果更接近预计值，约为平板计数结果的1.4倍，而real-time PCR定量结果则为平板计数的4.5倍（图5），说明ddPCR的准确度优于real-time PCR。