《表3.eps基因簇Arg R结合位点分析》

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《精氨酸代谢调控蛋白ArgR调控嗜热链球菌胞外多糖合成》

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Arg R蛋白作为转录调控因子在不同代谢途径中调控作用不同。例如，在猪链球菌中Arg R蛋白作为转录激活因子，激活精氨酸合成代谢中arc操纵子的结构基因表达[24]；而在嗜热栖热菌、谷氨酸棒杆菌和乳酸乳球菌等细菌中作为转录抑制子，结合操纵子上不同启动子，负调控精氨酸合成与分解代谢。在嗜热栖热菌中Arg R通过结合arg G启动子，负调控精氨酸合成代谢[23]；在谷氨酸棒杆菌中Arg R并非结合arg G启动子，而是通过结合arg C启动子，负调控精氨酸合成代谢[8]；在乳酸乳球菌中Arg R结合arg C、arg G和arc A启动子，负调控精氨酸代谢[26]。本研究为进一步证实Arg R功能，我们采用基因弱化策略来替代arg R基因敲除，通过反义RNA和正常RNA碱基互补来弱化基因表达[30]；反义RNA对基因表达抑制效果受多重因素影响，同一区域不同组合的反义序列在嗜热链球菌中效果也差异明显[31]。通过导入arg R反义序列弱化arg R基因表达，弱化后的EPS产量在12 h未变化，在24 h显著提高；而过表达arg R使EPS合成显著减少，证实Arg R作为一个转录抑制子，负调控嗜热链球菌EPS合成。本研究表明Arg R通过结合eps基因簇中Peps A启动子的ARG-box位点，负调控嗜热链球菌EPS合成，为阐明嗜热链球菌EPS生物合成的转录调控奠定基础。