《表3 SNPs引物序列信息》

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《安格斯牛Wnt8a基因多态性及其与生长性状的关联分析》

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提取的安格斯牛DNA样品经检测合格后送至北京康普森生物技术有限公司进行SNP分型检测，实验步骤如下：（1）引物设计：利用软件Assay design3.1设计引物并合成（表3）；（2） PCR扩增：扩增体系为10×PCR Buffer 0.5μL，25 mmol/L Mg Cl20.4μL，25 mmol/L d NTP Mix 0.1μL，5 U/μL Hot Star Taq0.2μL，水1.8μL，PCR Primer Mix 1μL，DNA 1μL；PCR扩增程序：95℃预变性120 s；95℃变性20 s，56℃复性30 s，72℃延伸60 s，共45个循环；72℃再延伸180 s；（3） SAP虾碱酶（Shrimp alkaline phosphatase）消化反应体系为：超纯去离子水1.53μL，SAP Buffer（10×）0.17μL，1.7 U/μL SAP酶0.3μL。SAP消化反应程序：37℃40 min，85℃5 min；（4）延伸反应：反应总体系：超纯去离子水0.619μL，Extend primer mix 0.94μL，i PLEX Buffer plus 0.2μL，i PLEX terminator 0.2μL，i PLEX酶0.041μL。延伸反应程序:94℃30 s；94℃5 s，52℃5 s，80℃5 s，共40个循环；72℃180 s；（5）上机检测:质谱检测后收集数据（张娟等，2018）。