《表3 引物名称及序列：大口黑鲈IGFBP1基因SNPs的筛选及与生长性状的关联分析》

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《大口黑鲈IGFBP1基因SNPs的筛选及与生长性状的关联分析》

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对已知的大口黑鲈转录组数据库（SRA436296）进行分析，得到IGFBP1的相关cDNA序列，同时分析NCBI数据库中其它物种相关信息，并主要参考花鲈（Lateolabrax japonicus）的该基因序列（JN692270.1）设计了8对引物（表3），送至广州艾基生物公司合成。最后筛选出合适引物，依次扩增获得大口黑鲈IGFBP1基因各片段，PCR反应体系包括20μL 2×Taq PCR master mix（TaKaRa，大连），上下游引物各1μL，模板DNA 1μL，加ddH2O使反应总体积达到40μL。PCR程序为预变性温度设置为94℃，时间4 min，再持续以下30个循环：变性温度94℃，时间30 s，退火温度55℃～58℃，30 s，延伸温度72℃，延伸30 s；循环结束后，相同温度下再延伸7 min结束程序。最终产物经1.2%琼脂糖凝胶电泳检测确认，产物测序工作交由广州艾基生物公司进行，测序结果返回后用Vector NTI Suite 11.0软件进行序列比对和组装及计算序列同源性，利用Mega 6.0软件的Neighbor-joining法构建系统进化树。